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RNA /外泌体/蛋白质/药物输送
2013-4-17  浏览量:4491

RNA /外泌体/蛋白质/药物输送

Samir ElAndaloussi, Yi Lee, Samira LakhalLittleton, Jinghuan Li, Yiqi Seow, Chris Gardiner, Lydia AlvarezErviti, Ian L Sargent & Matthew J A Wood (2012) 外排体介导的siRNA在体外和体内的输送Nature Protocols | Vol.7 No.12

使用小干扰RNA(siRNA)诱导的基因静默开辟了新药物探索的途径。然而,他们的治疗潜力因不足的特定组织性输送而受到阻碍。外排体是有希望打破不同生物性障碍的药物输送工具。在这里,我们展示了来源于培养细胞的外排体如何可以利用于体外和在体内的siRNAin输送。这个方案首先描述通过转染的表达载体产生针对性的外排体,包含融合了一个肽配体的外排体蛋白。然后,我们将解释如何纯化从转染细胞培养上清中的外排体和找出其特征。接下来,我们详细描述装载siRNA在外排体中的关键步骤。最后,我们列出了如何使用外排体有效地在体内和体外在小老鼠脑中输送siRNA。还提供了通过功能性化验和成像技术而得到的预期结果例子及作出评价。整个方案需时约3周。

纳米粒子跟踪分析 ●0.5小时
(i)使用NIST可追溯的聚苯乙烯微球来确认粒径测量。
(ⅱ)即将使用前在PBS中稀释外来体。通常情况下,初始稀释1:100。如果有必要,调整外排体的悬浮液,实现外排体的计数在每毫升2×108至1.0×109之间。
(ⅲ)将稀释后的样品加载样品室,并按需要调整镜头对焦。外排体应该会出现为锐利的光点。
(ⅳ)分析样品,使用NTA的文字脚本控制仪器操作来预先记录5个20秒的视频,每个记录之间有5秒的延迟。
(v)目视检查屏幕上的五个粒径概况的一致性。如果不接近一致,重复测量。
(vi)使用批量处理过程模式分析视频,并将结果导出到Microsoft Excel。